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捕获分子发光信号 这项技术看清了单分子化学反应

2021-08-19 09:23:57    来源:科技日报

教科书上的化学反应均以单分子形式进行概念描述,但实验中得到的却是大量分子的均结果。一瓶380毫升的水,约含有1025个水分子,投入金属钠会产生激烈的反应。那么,宏观可见的化学现象,具体到单个分子是怎样的表现?

单分子实验是从本质出发解决许多基础科学问题的重要途径之一。年来,虽已有单分子荧光显微镜技术、冷冻单分子电镜技术等诺贝尔奖级别的成果问世,但观察、操纵和测量最为微观的单分子化学反应仍是科学家面对的长期挑战。

8月11日,浙江大学(以下简称浙大)化学系冯建东研究员团队在国际顶级期刊《自然》发表封面文章。浙大团队以电致化学发光反应为研究对象,发明了一种可以直接对溶液中单分子化学反应进行成像的显微镜技术,并实现了超高时空分辨成像。该技术可实现更清晰的微观结构和细胞图像,在化学成像和生物成像领域具有重要应用价值。

捕获分子发光信号 1秒内连拍上千张图片

电致化学发光,是指具有发光活的物质在电极表面通过化学反应实现发光的形式,可令分子产生光信号,在体外免疫诊断、成像分析等领域已有应用。

“在溶液体系还难以开展单分子化学反应的直接光学捕捉。”冯建东介绍,单分子化学反应伴随的光、电、磁信号变化非常微弱,而且化学反应过程和位置具有随机,很难控制和追踪。

如何实现微弱乃至单分子水电致化学发光信号的测量和成像?如何在电致化学发光成像领域实现突破光学衍射极限的超高时空分辨率成像,即超分辨电致化学发光成像?3年来,冯建东团队致力于这两大难题的研究,通过联用自制的具有皮安水电流检出能力的电化学测量系统以及宽场超分辨光学显微镜,搭建了一套高效的电致化学发光控制、测量和成像系统。

“团队通过搭建灵敏的探测系统,将电压施加、电流测量、光学成像同步起来,通过时空孤立捕获到了单分子反应后产生的发光信号。”论文第一作者、浙大化学系博士生董金润介绍。

从空间上,研究团队通过不断稀释,控制溶液中的分子浓度实现单分子空间隔离。时间上,通过快速照片采集,最快在1秒内拍摄1300张,消除邻分子间的相互干扰。

利用这套光电控制和测量台,团队首次实现单分子电致化学发光信号的空间成像,其成像特点在于无需借助外界光源,可在暗室操作。

多重曝光合成叠加 实现纳米级超高分辨率

现如今,传统光学显微镜在数百纳米以上的尺度工作,而高分辨电镜和扫描探针显微镜则可以揭示原子尺度。“但能够用于原位、动态和溶液体系观测几个纳米到上百纳米这一尺度范围的技术非常有限。”冯建东提到,这主要在于受到光的衍射极限限制,光学成像分辨力不足,即相邻很的两个点难以分辨。

为此,冯建东团队在获取单分子信号图像的基础上,着手研究电致化学发光的超分辨成像。受到超分辨荧光显微镜技术的启发,研究团队利用通过空间分子反应定位的光学重构方法进行成像。

“好比人们夜晚抬头看星星,可以通过星星的‘闪烁’将离得很的两颗星星区分开一样。”冯建东介绍,技术原理即通过空间上的发光位置定位,再把每一帧孤立分子反应位置信息叠加起来,就能构建出化学反应位点的“星座”。

为验证这一成像方法的可行以及定位算法的准确,研究团队通过精密加工的方法,在电极表面制造了一个条纹图案作为已知成像模板,并进行对比成像,条纹间隔为几百个纳米。

记者看到,该微纳结构的单分子电致化学发光成像与电镜成像结果高度吻合。而且,单分子电致化学发光成像将传统上数百纳米的电致化学发光显微成像空间分辨率提升到了前所未有的24纳米。

研究团队进而将该成像技术应用于生物细胞显微成像,以细胞的基质黏附为对象,对其进行单分子电致化学发光成像,观察其随时间的动态变化,成像结果与荧光超分辨成像可关联对比,其分辨率也可与荧光超分辨成像相媲美。

“相比于荧光成像技术,电致化学发光成像不需要对细胞结构做标记,意味着不易影响细胞状态,对细胞可能是潜在友好的。”冯建东表示,未来,这项显微镜技术将作为一项研究工具,在单分子水揭示更多化学奥秘,也有助于揭示更为清晰的生物结构和看清生命基本单位细胞如何工作。(洪恒飞柯溢能本报记者江耘)

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